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Plateforme d'évaluation des neutrophiles

Objectif de l'étude

Ce projet vise à développer et à utiliser une plateforme permettant d’évaluer le dysfonctionnement des neutrophiles dans l’EM/SFC.

Investigateurs

  • Vanessa Velasco
  • Ronald Davis, PhD

Mises à jour et perspectives

  • La plateforme d’évaluation des neutrophiles a été conçue et testée. Nous avons réussi à isoler des neutrophiles à partir d’échantillons sanguins non traités provenant de témoins sains. À l’aide de ce dispositif, nous comparerons le comportement des neutrophiles provenant de patients atteints d’EM et de témoins sains lors d’un épisode inflammatoire et évaluerons si les neutrophiles des patients atteints d’EM sont dysfonctionnels.
  • Avant un épisode inflammatoire (EM = 3, témoins sains = 3) : les neutrophiles ont été surveillés pendant 3 heures et évalués toutes les 90 secondes. Les patients atteints d’EM présentent des moyennes plus élevées de populations de neutrophiles morts et apoptotiques entre 0,25 et 2,5 heures. Des populations mortes plus élevées sont observées jusqu’à 3 heures, mais les neutrophiles des patients atteints d’EM subissant une apoptose se stabilisent au niveau des témoins sains entre 2,5 et 3 heures. Les neutrophiles des patients atteints d’EM ont des populations de ROS légèrement plus faibles pendant t = 0-0,5 heure, puis à partir de t = 0,5-2 heures, ils indiquent des populations de ROS plus élevées. Après t = 2 heures, la population de ROS diminue en dessous de la moyenne des témoins en bonne santé. Les neutrophiles des personnes avec l’EM migrent à des vitesses moyennes plus faibles, sur des distances plus courtes, ont des déplacements et des durées de mouvement plus courts.
  • Deux articles sont en préparation sur l’isolement et l’évaluation des neutrophiles.
Hypothèse et description de l'étude

Le dysfonctionnement des neutrophiles est associé aux pathologies inflammatoires chroniques. Dans l’EM/SFC, un petit nombre d’études sur les neutrophiles indiquent une augmentation de l’apoptose précoce, une réduction des espèces réactives de l’oxygène (ROS), une régulation à la hausse d’un peptide de granule cytotoxique émis pendant les attaques de neutrophiles, et une diminution de la protéine de surface CD177, vitale pour la migration des neutrophiles et les activités d’élimination des bactéries. Pourtant, les caractéristiques des neutrophiles et les sources possibles d’inflammation, y compris la migration anormale et les attaques de l’hôte telles que les pièges extracellulaires des neutrophiles (NETosis), restent inexplorées.

Nous proposons d’élargir les connaissances actuelles sur le dysfonctionnement des neutrophiles dans l’EM/SFC. Ainsi, nous effectuerons une analyse multiparamétrique évaluant l’apoptose, la migration, les ROS et la NETose dans les populations de neutrophiles avant et après l’inflammation afin de découvrir une signature unique de la maladie et de fournir des informations indispensables sur les mécanismes de l’inflammation dans l’EM/SFC.

OBJECTIFS

Préparation pour une prise de sang. Belle jeune femme médecin africaine en uniforme médical blanc prête à prélever un échantillon de sang dans la veine du patient

  1. Développer et mettre en œuvre une plateforme d’évaluation des neutrophiles qui facilite l’isolement des neutrophiles à partir du sang total du patient et qui simule artificiellement un événement inflammatoire.
  2. Avant et après un épisode d’inflammation, comparer les caractéristiques des neutrophiles de patients atteints d’EM/SFC et de patients en bonne santé notamment l’apoptose, la migration, les espèces réactives de l’oxygène (ROS) et les pièges extracellulaires des neutrophiles (NETs).

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Microvésicules et séquençage viral

Les microvésicules sont un type de vésicule extracellulaire qui est libérée de la membrane cellulaire. Les vésicules sont de petits sacs ou vacuoles remplis de liquide dans l'organisme. Le séquençage est une technique utilisée pour déterminer la séquence exacte des bases (A, C, G et T) dans une molécule d'ADN (ou virale).

NMR Metabolomics
NMR (Nuclear Magnetic Resonance) is an instrument/tool used to perform metabolic studies, metabolic profiling, and metabolomics in biofluids and tissues for more than 40 years using magnetic fields. There is a very close connection between metabolic measurements and NMR. This connection has flourished because of NMR’s many unique strengths for characterizing complex mixtures’ chemical composition.
Protéomique

L'étude à grande échelle des protéines, qui sont de grandes molécules complexes nécessaires à la structure, à la fonction et à la régulation des tissus et des organes du corps humain.

Autoanticorps

Les anticorps qui réagissent avec les molécules de l'organisme et qui sont présents chez les personnes en bonne santé sont appelés anticorps naturels ou auto-anticorps.

L'ADN extracellulaire pour la réactivation virale

L'ADN extracellulaire est souvent sécrété activement et est utilisé pour effectuer plusieurs tâches, offrant ainsi une cible ou un outil attrayant pour les applications biotechnologiques, médicales, environnementales et microbiologiques générales. Les virus sont des parasites intracellulaires qui dépendent dans une large mesure de la cellule hôte pour leur réplication. La réactivation virale se produit lorsqu'une réplication active du génome viral entraîne une infection lytique (dégradation de la cellule) caractérisée par la libération de nouvelles particules virales progénitrices (descendantes).

Profilage des cellules immunitaires

Le système immunitaire joue de nombreux rôles régulateurs importants dans le développement et la progression des maladies. Compte tenu de l'émergence de thérapies immunitaires efficaces, des prédicteurs fiables de la réponse sont nécessaires. Le profilage des cellules immunitaires détermine la réponse en évaluant les populations de cellules immunitaires provenant d'échantillons traités et non traités. Dans notre cas, nous évaluerons la réponse des globules blancs à l'infection virale en utilisant un procédé appelé "Cytof".

Génomique des leucocytes

Un leucocyte est une cellule incolore qui circule dans le sang et les liquides organiques et qui est impliqué dans la lutte contre les substances étrangères et les maladies. Un génome est l'ensemble du matériel génétique d'un organisme. La génomique est un domaine de la biologie qui se concentre sur la structure, la fonction, l'évolution, la cartographie et l'édition des génomes. Par conséquent, la génomique leucocytaire est l'étude de tout le matériel génétique des leucocytes.

Métabolomique

Métabolomique est une façon d'étudier le métabolisme, c'est-à-dire de mesurer les quantités de métabolites (petites molécules) produites par notre corps lorsque nous transformons les aliments en énergie et autres molécules dont nos cellules ont besoin pour survivre. La technologie métabolomique est "à grande échelle", ce qui signifie que plusieurs milliers de métabolites peuvent être mesurés à partir d'un seul échantillon, par exemple de sang ou d'urine.

Micro ARN

Les cellules utilisent le Micro ARN pour contrôler si un gène particulier produit trop, trop peu ou la quantité normale de sa protéine à un moment donné.